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ELISA中常见问题及解决方法

ELISA中常见问题及解决方法

ELISA工作站检测因灵敏度高、特异性好而在临床上得到广泛应用。但是,在操作的各个环节对测试的检测效果有较大的影响。如果不注意,可能会导致显色不全、图案不全等结果。我们将在操作的各个环节中经常出现的问题的原因和解决方法总结如下,希望能给您一些启发,提高实验的质量。


一全自动ELISA试剂的选择


选用高质量的检测试剂完全自动化的ELISA并严格按照说明书操作。操作前,将试剂在室温下平衡30-60分钟。


Ⅱ。全自动ELISA上样


1.可能的原因:


(1)血清或血浆样品分离不好时,补充样品;


(2) 手动操作时,样本盘过多会导致样本放入培养箱前等待时间过长(尤其是在室内温度较高时);


(3)加入样品,加入酶试剂后,酶从孔中飞溅出来。


2.解决方案:


(1)标本为血清:最好自然保存1-2小时,然后3000rpm离心15分钟;

标本为血浆:必须使用含有抗凝剂的血液标本采集管,采血后立即倒置混合5-10次。一段时间后,3000rpm离心15分钟;

如果在几天内进行测试,可以放在2-8°C的冰箱中,如果要储存,可以放在-20°C的低温冰箱中。


(2)加样后及时将样品放入培养箱中。

(3)加入酶试剂后,用吸水纸将微量滴定板表面擦干。

(4) 如果使用AT或其他自动样品添加,最好选择FAME或其他后处理仪器添加酶试剂。

(5) 当样本较多时,请分批操作。


三全自动ELISA的培养


1.可能的原因:


(1) 培养过程中没有盖子或盖子,因此样品或稀释剂蒸发并吸附到孔壁上,难以彻底清洁;


(2)人为延长孵育时间,导致非特异性结合紧紧围绕反应较好,难以彻底清洁。


2.解决方案:


(1) 附上封面或封面;


(2)严格按照说明书控制操作时间。


Ⅳ。全自动酶联免疫吸附试验洗涤板


1.可能的原因:


(1) 手动清洗板,液体穿过孔间;


(2)半自动洗板机在洗板时,洗涤液量不足,导致洗板不完全;洗板针堵塞导致吸力不完全;洗版差导致洗版效果差;


(3)反应板过多,导致洗板等待时间长。


2.解决方案:


(1)确保洗液填满小孔,洗涤针畅通。洗完盘子后,最好在吸水纸上轻轻拍干(选择干净、无灰尘或少灰尘的吸水材料);


(2) 合理安排,或多用洗板机。


Ⅴ。全自动ELISA显色


1.可能的原因:


(1) 显影剂配制后放置时间过长或使用过期显影剂的;


(2)当加入显影液时,显影液从孔中飞溅出来,使液体回流。


2.解决方案:


(1)显影剂应尽量在使用前准备好,过期的显影剂不应使用。未使用浅蓝色TMB显影剂;


(2) 添加样品时防止显影剂流出;


(3) A、B液应避免与金属设备接触。


六全自动ELISA的终止


可能原因:如添加停止液时气泡增多,导致误报增加。因此,加入止损液时应避免气泡。


七全自动酶联免疫吸附试验的平板读数


如果读取平板时平板底部不干净,确保微量滴定板干净。因此,在整个操作过程中,确保ELISA板不接触次氯酸,尽可能实现全自动ELISA检测标准的自动化,有效提高检测质量。此外,选择合格的ELISA也是很重要的工作站的供应商.


在实际操作中,除了选择好的试剂外,还必须严格遵循操作步骤。同时,做好室内质量控制和外部质量评价,以严谨的工作作风对每一个标本进行检验,确保检验质量。目前国内已有不少单位实现了全自动酶标仪,为实现酶标仪标准化检测的全自动、提高检测质量发挥了重要作用。

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