酶联免疫吸附试验常见问题及解决方法

ELISA工作站检测因其灵敏度高、特异性好而被广泛应用于临床。但操作中的各个环节对检测的检测效果影响较大。如果不注意，可能会导致不完全的显色、图案等结果。我们将操作中每个环节经常出现的问题的原因及解决方法总结如下，希望能给大家一些启发，提高实验质量。

Ⅰ。全自动ELISA试剂的选择

选用高质量的检测试剂完全自动化的ELISA并严格按照说明书操作。操作前，将试剂在室温下平衡30-60分钟。

Ⅱ。全自动ELISA上样

1.可能的原因:

(1)若血清或血浆样本分离不好，可加样;

(2)人工操作时，样品板过多，会导致样品进入培养箱前等待时间过长(尤其是室内温度较高时);

(3)加样、加酶试剂后，酶从孔中溅出。

2.解决方案:

(1)标本为血清:血液最好自然储存1-2小时，然后3000rpm离心15分钟;

标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血样采集管，采血后立即倒置混合5-10次。一段时间后，3000转/分离心15分钟;

如果在几天内测试，可放入冰箱2-8℃，如果要储存，可放入-20℃的低温冰箱。

(2)加样后及时将样品放入培养箱。

(3)加入酶试剂后，用吸水纸擦拭微量滴定板表面晾干。

(4)如采用AT或其他自动加样，加酶试剂最好选用FAME或其他后处理仪器。

(5)标本多时，请分批操作。

Ⅲ。全自动ELISA孵育

1.可能的原因:

(1)孵育时无盖或盖板，使标本或稀释剂蒸发吸附在孔壁上，难以彻底清洁;

(2)人为延长孵育时间，导致反应周围非特异性结合紧密良好，难以彻底清洗。

2.解决方案:

(1)附有封面或封面;

(2)严格按照说明书控制操作时间。

Ⅳ。全自动ELISA洗涤板

1.可能的原因:

(1)手动洗盘，液体在孔间交叉;

(2)使用半自动洗盘机洗盘时，洗涤液量不足，导致洗盘不全;洗盘针堵塞，导致吸盘不全;洗板差导致洗板效果差;

(3)反应板过多，导致洗盘等待时间过长。

2.解决方案:

(1)确保洗液填满小孔，洗针畅通。洗完盘子后，最好在吸水纸上轻轻拍干(选择干净、无或少灰尘的吸水材料);

(2)合理布置，或多使用洗盘机。

Ⅴ。全自动ELISA显色仪

1.可能的原因:

(一)配制显影剂时间过长或者使用过期的显影剂的;

(2)添加显影剂时，从孔中溅出，使液体回流。

2.解决方案:

(1)使用前应尽量准备好显影剂，过期的显影剂不得使用。浅蓝色TMB显影剂未使用;

(2)加样时防止显像液流出;

(3) A、B液应避免与金属设备接触。

Ⅵ。终止全自动ELISA

可能原因:如添加停止液时气泡增多，导致误报增加。因此，添加停止液时应避免产生气泡。

Ⅶ。全自动ELISA的平板读数

如果读板时底板不干净，请确保微量滴定板是干净的。因此，在整个操作过程中，确保ELISA平板不接触次氯酸，尽可能实现全自动ELISA检测标准的自动化，有效提高检测质量。此外，选择合格的ELISA试剂也很重要工作站的供应商．

在实际操作中，除了选择好试剂外，还必须严格遵守操作步骤。同时，要做好室内质量控制和外部质量评价工作，以严谨的工作作风检查每一个标本，确保检查质量。目前，国内相当多的检测单位已经实现了全自动化的酶标仪，为实现全自动ELISA标准化检测，提高检测质量发挥了重要作用。