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临床全自动ELISA的常见模式

临床全自动ELISA的常见模式

根据抗原和抗体测定的不同,临床实验室中有许多自动ELISA测量模式,如直接法、间接法、双抗体夹心法(直接、间接)、竞争抑制法(直接、夹心等)、捕获法等,常用的ELISA检测方法有双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、竞争抑制法和捕获法。


在抗原测定中,最常用的蛋白质大分子抗原测定方法是双抗体夹心法。对于只有一个表位的小分子,采用竞争抑制法;抗体检测通常采用间接法、双抗原夹心法、竞争抑制法和捕获法。


1.ELISA工作站双抗体夹心法


对于含有多个表位的大分子蛋白质ELISA工作站用双抗体夹心法测定它是相当简单的。现有的商业化蛋白质抗原检测试剂盒基本上都采用这种检测模式。


第一批用于抗原双抗体夹心检测的全自动ELISA试剂盒均采用“两步法”。后来,为了缩短检测时间和简化操作步骤,试剂制造商逐步推出了“一步法”医疗测试包.


目前,我院临床实验室对HBsAg、甲胎蛋白(α-甲胎蛋白,αFP)、前列腺特异性抗原(PSA)、CA系列标志物、hCG、激素等大分子抗原的检测基本上采用一步法。与两步法相比,一步法操作简单,但有其固有的缺点。如果处理不当,由于钩子效应的存在,双抗体夹心免疫分析结果将为假阴性或低定量结果。


2.ELISA工作站的竞争法测试


小分子半抗原,如地高辛、茶碱和其他药物和激素,如T3、T4和睾酮,可能只有一个表位。或者由于分子太小,在与一种抗体结合后,由于空间位阻,它不能与另一种抗体结合,因此双抗体夹心法不能用于测量。ELISA工作站只能使用竞争抑制法。


在这种分析模式下,需要获得小分子和酶的组合。小分子酶结合物的制备不像抗体酶结合物那样简单,纯化也比较困难。小分子结合酶和游离酶之间的分子量差异很小,使用普通分子筛方法很难分离。因此,一些人试图建立一种双抗体夹心竞争ELISA方法,用于基于双聚体或多聚体小分子合成的小分子测定。提高了测定的灵敏度和特异性。


3.ELISA工作站中抗体的间接测定方法


测量人体产生的针对传染病病原体抗原的抗体,对患者也是如此狗万3.0手机客户端 . 在难以获得高纯度和明确定义的抗原之前,或当抗原更复杂时,通常使用间接方法。


目前临床常用的丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测项目均为间接法,而间接法用于检测抗体。严格来说,只测量IgG类抗体,不涉及IgM和IgA类抗体。这是由酶标记的二级抗体决定的。目前,一些特异性IgⅢ抗体检测试剂盒采用间接法。


4.ELISA工作站双抗原夹心法


双抗原夹心法检测的抗体包括所有类型的特异性抗体,不受非特异性IgG的干扰。因此,双抗原夹心法检测抗体的灵敏度和特异性均高于间接法。目前,为了提高抗体检测的灵敏度,ELISA工作站的试剂盒基本上采用了双抗原夹心法,只是抗-HCV由于其抗原的原因更加复杂。


5.竞争法


抗体的测定通常不使用竞争法。当抗原中的杂质难以去除或抗原的结合特异性不稳定时,ELISA工作站可使用此模式确定抗体。最典型的例子是测定乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)。

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